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      技術文章
      看完這些你就知道什么是酵母雙雜交載體了
        酵母雙雜交載體是將待研究的兩種蛋白質分別克隆(融合)到酵母表達質粒的轉錄激活因子(如GAL4等)的DNA結合結構域(DNA-BD)和轉錄激活域(AD)上,構建成融合表達載體,從表達產物分析兩種蛋白質相互作用的系統。
       
        酵母雙雜交載體的建立是基于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。細胞起始基因轉錄需要有反式轉錄激活因子的參與。
       
        反式轉錄激活因子,例如酵母轉錄因子 GAL4在結構上是組件式的(modular),往往由兩個或兩個以上結構上可以分開,功能上相互獨立的結構域(domain)構成,其中有DNA結合功能域(DNA binding domain,DNA-BD)和轉錄激活結構域(activation domain,DNA-AD)。
       
        這兩個結合域將它們分開時仍分別具有功能,但不能激活轉錄,只有當被分開的兩者通過適當的途徑在空間上較為接近時,才能重新呈現完整的GAL4轉錄因子活性,并可激活上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)的下游啟動子,使啟動子下游基因得到轉錄。
       
        雙雜交系統的建立得力于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。細胞起始基因轉錄需要有反式轉錄激活因子的參與。
       
        80年代的工作表明, 轉錄激活因子在結構上是組件式的(modular), 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互獨立的結構域構成,其中有DNA結合結構域(DNA binding domain,簡稱為BD)和轉錄激活結構域(activation domain,簡稱為AD),它們是轉錄激活因子發揮功能所必需的。
       
        單獨的BD雖然能和啟動子結合,但是不能激活轉錄。而不同轉錄激活因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的激活轉錄的功能。
       
        如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性激活結構域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結合到Gal4結合位點并激活轉錄。
       
        在酵母雙雜交系統中,"誘餌"蛋白X克隆至DNA-BD載體中,表達DNA-BD/X融合蛋白;待測試蛋白Y克隆至AD載體中,表達AD/Y融合蛋白。
       
        一旦X與Y蛋白間有相互作用,則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近,恢復行使功能,激活報告重組體中LacZ和HIS3基因的表達。
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